观察血细胞涂片及使用光学显微镜观察和区分红细胞与各种白细胞

一、实训目的

（1）掌握微量采血及血涂片的制作方法。

（2）学习使用光学显微镜观察和区分红细胞与各种白细胞。

二、实训器材

医用采血针、酒精棉球、载玻片、血推片、瑞氏染液、蒸馏水、光学显微镜。

三、实训内容和方法

（1）取外周血一滴置于玻片的一端，左手持载玻片，右手以边缘平滑的血推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿血推片散开。然后使血推片与载片夹角保持30°～45°角平稳地向前移动，载片上保留下一薄层血膜。

（2）血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动，使血膜迅速干燥，以免血细胞皱缩。用蜡笔在血膜两侧画线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。加瑞氏染液2～3滴，使覆盖整个血膜，固定0.5～1.0min。滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水，与染料混匀染色5～10 min。

（3）用清水冲去染液，待自然干燥后或用吸水纸吸干，即可置血涂片于显微镜下进行镜检。

图3-5-1 正常油镜下血涂片的形态特点

（4）镜下观察血涂片：选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，分别用低倍镜、高倍镜和油镜观察血涂片，注意观察不同的血细胞的形态和其镜下数量的区别。图3-5-1为油镜下正常的血涂片。在正常情况下血膜外观为粉红色，在显微镜下红细胞呈肉红色；白细胞胞质能显示各种细胞的特有色彩：嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染成粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞质为酸性，与碱性染料亚甲蓝（美蓝）结合，染成紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染成淡紫色，称为中性物质。根据色彩及形态不同可区分出各类血细胞。

四、实训结果和分析(www.zuozong.com)

观察油镜下的各种血细胞，根据血细胞的形态特点区分辨别不同血细胞的名称。指出哪种血细胞数量最多，哪种血细胞数量其次，哪种血细胞数量较少，哪种血细胞数量最少？

五、注意事项

（1）玻片的清洗：新玻片常有游离碱质，因此应用清洗液或 10%盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20min，再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗，必要时再置 95%乙醇中浸泡1h，然后擦干或烤干备用。使用玻片时只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

（2）细胞染色对氢离子浓度十分敏感，配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则各种细胞染色反应异常，致使细胞的识别困难，甚至造成错误。

（3）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头体尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。

（4）若血膜未干透，细胞尚未牢固附在玻片上，在染色过程中容易脱落，因此血膜必须充分干燥。

（5）染液不可过少，以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净。

（6）冲洗时应用流水将染液冲去，不能先倒掉染液，以免染料沉着于血片上。

想一想

（1）描述观察到的镜下各种血细胞的颜色、形态和数量。

（2）细菌感染时白细胞分类中哪项细胞会增高？